ESTM - Mestrado em Biotecnologia dos Recursos Marinhos
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- Building reference library for marine fish species of Azores archipelago and biomonitoring via DNA metabarcodingPublication . Luz, Adriana Silveira; Keskin, Emre; Novais, Sara CalçadaO arquipélago dos Açores é um habitat essencial para espécies em zonas costeiras e montes submarinos, onde a sua biodiversidade é bem registada, mas de difícil monitorização devido à vasta área da Zona Económica Exclusiva (ZEE) de Portugal. Existem poucos estudos genéticos sobre espécies marinhas do arquipélago dos Açores, e menos ainda com recurso a metodologias de eDNA. O objetivo deste estudo foi compor uma biblioteca de referência de barcodes de DNA e realizar um estudo de riqueza e abundância de espécies de peixes marinhos na Ilha Graciosa (aprox. 61km2), com recurso a eDNA, avaliando os padrões no espaço e no tempo de amostras oceânicas e costeiras, e dentro e fora das Áreas Marinha Protegidas (AMPs). As espécies com barcodes são principalmente peixes comerciais disponíveis no mercado local, e algumas espécies de recife (n=35). As extrações e purificações de DNA de tecidos foram feitas com kits comerciais com pequenas modificações. As regiões selecionadas foram a subunidade I do Citocromo Oxidase (COI), usando os primers Fish F1/R1, Fish F2/R2 e a região do gene 12S do mtDNA, sendo esta última também usada para metabarcoding de eDNA usando os primers MiFish – U F/R. Para as amostras de eDNA, 2 L de água da superfície do mar foram filtrados com uma membrana de 0,45 μm. A região alvo 12S foi amplificada usando um PCR de alta fidelidade de etapa única com primers e diferentes tags com protocolo de ligação de adaptador, e sequenciado numa plataforma de sequenciação de alto rendimento com resolução de leitura/amostra de 500K. A preparação da biblioteca de barcodes resultou na amplificação bem sucedida das espécies locais e na entrada de alguns primeiros registros dessas regiões génicas nos bancos de dados Genbank e BOLD. O estudo de eDNA identificou com sucesso 33 MOTUs de peixes, demonstrando uma não variação de riqueza das espécies nas variáveis definidas, porém revelou diferenças significativas na abundância geral durante o verão, e também em amostras costeiras, ao mesmo tempo em que revelou uma espécie significativamente mais abundante no interior das AMPs durante o verão (Macroramphosus scolopax), uma das presas das espécies de aves protegidas residentes nos ilhéus, Reserva da Biosfera da Ilha Graciosa. Além de alguns resultados inesperados que podem ser explicados por fatores bióticos e abióticos, esta metodologia mostrou ser possível obter dados instantâneos da estrutura da comunidade, que podem ser usados para complementar os levantamentos visuais, identificar espécies raras ou novas espécies invasoras, bem como apoiar questões de decisão na gestão ecológica regional.
- Mechanisms of action of Asparagopsis armata ethanolic extract against the shrimp pathogen Vibrio parahaemolyticusPublication . Dias, Pedro David Martins; Lemos, Marco Filipe Loureiro; Félix, Carina Rafaela Faria da CostaEnvironmental pollution, climate change and natural resource scarcity are some societal challenges that, nowadays, new sustainable production systems must respond to. For that, a greener bioeconomy concept based on biotechnological innovations should be implemented, creating new value chains and implementing the concept of Circular Economy. One example of creating new value chains from the environment is giving biotechnological value for invasive species as the macroalgae Asparagopsis armata. Asparagopsis armata have already shown a variety of biotechnological applications, as in food and feed industries, including antimicrobial, antioxidant, among many other activities. In the aquaculture context, the inclusion of an ethanolic extract from this macroalgae in the feed of Litopenaeus vannamei showed higher survival rates (above 50%) when shrimps were infected with Vibrio parahaemolyticus, an increase in immunological responses, and a significant increase on the shelf life of the feed was also obtained. The main goal of this dissertation was to unveil the potential mechanisms of action of this ethanolic extract facing Vibrio parahaemolyticus, using two complementary approaches, biochemical assays and real time quantification of several genes potentially involved. The results obtained for the antimicrobial activity revealed that the ethanolic extract at 2mg/mL can totally inhibit the growth of V. parahaemolyticus, presenting MIC and MBC at this concentration, showing a similar pattern in the time-kill assay, performed to evaluate the growth of the bacteria in the presence of the extract at different concentrations along time. Regarding the viability activity, an increase of the activity was found in the presence of 1 mg/mL along time, while at 2mg/mL no viability activity was observed. The leakage of intracellular proteins through the bacterial membrane showed higher concentrations in the extracellular matrix when V. parahaemolyticus was in contact with the 2 mg/mL concentration and the biofilm formation was inhibited by the presence of the extract at the same concentration, both situations showing a similar behavior of the antibiotic control. Considering the real time quantification of genes related with basal functions (rpoS) and genes related to virulence (tuf, toxR, luxR, pirA and pirB), increasing concentrations showed to increase the gene expression in general, with the exception of pirB gene. These results indicate that in the presence of 1/4 MIC concentration, V.parahaemolyticus had the necessity to increase the expression of genes that may contribute to the survival of the cells. Conjugating all the data obtained in this study, important clues regarding the potential mechanisms of action of A. armata extract were deciphered, contributing not only to understand their antimicrobial potential but also to define crucial future work to entirely unveil the mechanism of action associated to this extract.
- Search for mycosporine-like amino acids and fatty acids in Isochrysis galbana and Nannochloropsis gaditanaPublication . Furtado, JoanaIn this work two unialgal cultures, one of Isochrysis galbana (I. galbana) and another of Nannochloropsis gaditana (N. gaditana), were exposed to photosynthetic active radiation (PAR) plus ultraviolet radiation (UVR-B) (supplemented with 4h daily) in a photoperiod 16h: 8h, light: dark cycle. The content on mycosporine-like amino acids (MAAs) was determined by reverse phase isocratic high performance liquid chromatography (HPLC) employing C18 phase, in methanolic and aqueous methanolic extracts. No MAAs were identified, with the five standards available, but a peak (unknown compound) with absorption maximum (ëmax) at 338 nm was detected. The content on fatty acids (only for N. gaditana) was determined by gas chromatography (GC), eight fatty acids were identified (in ten presented in N. gaditana) and the most abundant fatty acid was the palmitic acid with 26,86% of the total fatty acids. In order to identify new sources of safe and inexpensive antioxidants, the antioxidant activity of different fractions of N. gaditana was evaluated, by the á,á-diphenyl-â-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging assay. The N. gaditana was extracted using nhexane, ethyl acetate and water by a three-step sequential extraction procedure. The results varied between 0,23±0,46% and 1,23±0,60%, for the three fractions, when compared with the commercial standard butylated hydroxytoluene (BHT) that obtained a 95,0±2,68% of capacity for reduction of DPPH. With this work was concluded that the extracting procedures used were not adequate for the extraction of this kind of compounds, not only for the finding of MAAs or another UVabsorbing compounds, but also for other compounds with antioxidant properties. The results obtained for the extraction procedure for fatty acids showed good results.
- Produção de hidrolisados de proteína de pescado (HPP) a partir de subprodutos da indústria do pescado de Peniche – AplicaçõesPublication . Santos, Maria de FátimaO objetivo deste trabalho foi a produção de hidrolisados proteicos a partir de subprodutos de sardinha (Sardina pilchardus) da indústria local e a avaliação do seu potencial como aditivos alimentares. A enzima utilizada foi a Neutrase®, tendo sido testados diferentes concentrações de enzima (0%, 0,5%, 1%, 1,5% e 3%) e tempos de hidrólise (0, 20, 40 e 60 minutos) de modo a obter um varrimento das características funcionais dos hidrolisados produzidos em diferentes condições. Os hidrolisados líquidos foram sujeitos a secagem por spray drying para redução de volume e aumento da sua estabilidade. Foram obtidos rendimentos médios de recuperação proteica de 22% e 10% para os hidrolisados líquidos e em pó, respetivamente. Os hidrolisados em pó apresentaram o teor de humidade médio de 4,4% e tonalidade clara. Não foi observado um efeito significativo da concentração de enzima nem do tempo de hidrólise no grau de hidrólise dos hidrolisados obtidos, tendo sido obtido um grau de hidrólise médio de 22±6% %. O potencial de utilização dos hidrolisados como aditivos alimentares foi avaliado através dos seguintes parâmetros: capacidade antioxidante pela redução do DPPH, capacidade de formação e estabilização de emulsões, capacidade de formação e estabilização de espumas, efeito da adição de soluções de hidrolisados na textura, perda de água e alteração de cor em salmão e pescada refrigerados e congelados. Os hidrolisados líquidos obtidos apresentaram capacidades de redução do radical DPPH entre 10 e 50%. Foi observada uma redução significativa da capacidade de redução do radical DPPH nos hidrolisados sólidos, associada à temperatura selecionada para a secagem: 135ºC. A adição dos hidrolisados produzidos com 0.5 e 3% de enzima e 20 minutos de hidrólise a cubos pescada fresca resultou numa redução da percentagem de perda de água 3 semanas após congelação. A alteração global da cor de pescada congelada durante 3 semanas e refrigerada durante 7 dias foi minimizada com a adição de hidrolisados produzidos com 1% de Neutrase® (tempo de hidrólise de 20 minutos). Os hidrolisados produzidos com 0.5% de Neutrase® (20 min de hidrólise) minimizaram a alteração global da cor em cubos de salmão congelado. Relativamente ao potencial da utilização dos hidrolisados como agentes emulsificantes e estabilizantes, foi observada uma capacidade de emulsificação em azeite e óleo comparável à do caseinato de sódio na maioria das amostras testadas. As amostras produzidas na ausência de Neutrase®, aos tempos de 0 e 20 minutos formaram emulsões estáveis com azeite e óleo (35% do volume inicial da emulsões permaneceu após 24horas a 2200xg durante 3minutos à temperatura ambiente. Os resultados obtidos sugerem o potencial da aplicação da hidrólise enzimática de subprodutos de sardinha na produção de agentes crioprotectores em pescado congelado, aditivos antioxidantes e agentes emulsificantes, tecnologia que poderá gerar produtos de elevado valor acrescentado. Uma investigação sobre a utilização de diferentes enzimas, recorrendo a vasos reacionais com agitação mecânica e uma otimização das condições de secagem para rentabilizar o rendimento de recuperação proteica global do processo e minimizar alterações funcionais no passo de secagem serão essenciais para uma avaliação mais detalhada das funcionalidades destes hidrolisados e da relação entre essas funcionalidades e as condições de produção.
- Avaliação da capacidade antioxidante e antimicrobiana em algas da costa de Peniche (Portugal): identificação de compostos bioactivos com elevado potencial biotecnológicoPublication . Pinteus, SuseteNeste trabalho foi avaliado o potencial biotecnológico de dez algas da costa de Peniche relativamente à sua capacidade antioxidante e antimicrobiana. As algas analisadas foram Asparagopsis armata, Plocamium cartilagineum, Ceramium ciliatum, Sphaerococcus coronopifolius, Codium adhaerens, Ulva compressa; Fucus spiralis, Saccorhiza polyschides, Stypocaulon scoparium e Halopteris filicina. A identificação de compostos bioactivos das algas que revelaram o maior potencial biotecnológico também foi alvo de estudo. Os compostos bioactivos foram extraídos das algas com recurso a solventes, nomeadamente metanol, n-hexano e diclorometano. Estes extractos foram utilizados em todos os ensaios experimentais. A capacidade antioxidante foi determinada através da Quantificação Total de Polifenóis (QTP) pelo método de Folin-Ciocalteu e através da avaliação da capacidade de redução do radical 1, 1-Difenil-2-picrilhidrazil (DPPH). A capacidade antimicrobiana foi avaliada através do método de difusão em disco em Bacillus subtilis e Escherichia coli. Por outro lado, a actividade antifúngica foi avaliada pelo acompanhamento da curva de crescimento de Saccharomyces cerevisiae na ausência e na presença dos extractos das algas. A identificação de compostos bioactivos foi realizada por espectrometria de massa com ionização por “electrospray” (ESI-MS). A alga Fucus spiralis, na fracção metanólica, foi a alga que apresentou maior actividade antioxidante, com 90,01 ± 0,003 mg de equivalentes de ácido gálico/g extracto. As algas Saccorhiza polyschides e Fucus spiralis exibiram o efeito mais potente na capacidade de redução do DPPH, com IC50 de 0,049 e 0,099 mg de extracto metanólico/ml, respectivamente. Relativamente à capacidade antimicrobiana, não existiram resultados positivos contra E. coli. No entanto existiram vários resultados positivos contra Bacillus subtilis, tendo sido a alga Asparagopsis armata (fracção metanólica) a que apresentou o maior potencial com um halo de inibição de 10 mm para a menor concentração a que se obteve actividade (100 μg/disco). Quanto à actividade antifúngica, alga Sphaerococcus coronopifolius produziu um efeito inibitório muito potente no crescimento de Saccharomyces cerevisiae, com IC50 de 56,44; 78,9 e 40,2 μg/ml nas fracções metanólica, diclorometano e n-hexano, respectivamente. Não foi possível identificar as principais moléculas responsáveis pela actividade antimicrobiana e antioxidante, no entanto foram identificados dois ácidos gordos de cadeia longa, na fracção do diclorometano da alga Sphaerococcus coronopifolius, o ácido heptadecanóico e o ácido oleico. Pela realização deste trabalho podemos concluir que as algas castanhas Fucus spiralis e Saccorhiza polyschides foram as que apresentaram mais poder antioxidante. Por outro lado, as algas vermelhas Sphaerococcus coronopifolius e Asparagopsis armata destacaram-se pelo elevado potencial antimicrobiano. Das quatro algas referidas, as algas Fucus spiralis e Sphaerococcus coronopifolius, pela potência dos resultados obtidos na capacidade antioxidante e na capacidade antifúngica, respectivamente, são as algas que abrem maiores janelas para a identificação e obtenção de novas moléculas com potencial biotecnológico relevante.
- Avaliação da capacidade citotóxica de macroalgas da costa de Peniche (Portugal) em células tumorais humanasPublication . Alves, CelsoOs tumores malignos são uma das maiores causas de morte em humanos, podendo tornar-se na primeira causa de morte nos países desenvolvidos em 2015. Os organismos marinhos produzem moléculas bioativas, normalmente como metabolitos secundários em resposta a pressões ecológicas. Estudos anteriores têm demonstrado que estes organismos são uma fonte importante de novas moléculas com potencial farmacológico contra o cancro. Neste trabalho foi avaliado o potencial antitumoral de doze algas da costa de Peniche em células do adenocarcinoma colorectal humano (Caco-2) e do carcinoma hepatocelular humano (HepG-2). As algas estudadas foram Fucus spiralis Halopteris filicina, Saccorhiza polyschides, Stypocaulon scoparium, Asparagopsis armata, Plocamium cartilagineum, Ceramium ciliatum, Sphaerococcus coronopifolius, Codium adhaerens, Codium tomentosum, Codium vermilara e Ulva compressa. A extração dos compostos bioativos foi realizada com solventes de diferente polaridade (metanol, diclorometano e n-Hexano). O potencial antitumoral das frações metanólica e diclorometano foi testado nas linhas celulares Caco-2 e HepG-2 através de ensaios de citotoxicidade e proliferação celular. Os resultados foram obtidos pela realização de ensaios espectrofotométricos, método do 3-[4, 5-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), e por ensaios fluorimétricos, método de calceína-AM. As algas que exibiram maior potencial citotóxico pela redução da viabilidade celular (1mg.ml-1, 24h) foram as mesmas para linha celular Caco-2 e HepG-2, a alga A. armata, F. spiralis e S. coronopifolius, com a exceção da fração diclorometano da P. cartilagineum que exibiu maior efeito nas células Caco-2 (9,77 ± 2,28% células viáveis). Na fração metanólica observaram-se efeitos citotóxicos marcados para as algas F. spiralis (23,68 ± 2,93% de células Caco-2 viáveis; 44,04 ± 5,44% de células HepG-2 viáveis), A. armata (7,32 ± 1,17% de células Caco-2 viáveis; 11,22 ± 2,98% de células HepG-2 viáveis) e S. coronopifolius (3,53 ± 1,26% de células Caco-2 viáveis; 14,04 ± 2,62% de células HepG-2 viáveis). Na fração diclorometano as algas A. armata (1,04 ± 0,39% de células Caco-2 viáveis; 1,51 ± 0,38% de células HepG-2 viáveis) e S. coronopifolius (1,92 ± 0,89% de células Caco-2 viáveis; 12,84 ± 3,82% de células HepG-2 viáveis) foram as mais citotóxicas. Todos os efeitos observados foram dependentes da concentração. A fração diclorometano da alga S. coronopifolius demonstrou ser a mais potente na redução da viabilidade das celulas Caco-2 e HepG-2, com IC50 de 21,3 e 14,1 ƒÊg ml-1, respetivamente. Na proliferacao celular, as fracoes metanolicas (1mg m-1, 24h) que apresentaram maiores efeitos de inibicao nas linhas tumorais utilizadas foram a A. armata (24,32 } 7,56% de celulas Caco-2; 43,42 } 7,69% de celulas HepG-2) e S. coronopifolius (34,84 } 4,45% de celulas Caco-2; 44,87 } 3,64% de celulas HepG-2) para ambas as linhas celulares e a F. spiralis (44,60 } 6,75% de celulas), apenas para as celulas HepG-2. Na fracao diclorometano (1mg m-1, 24h) a A. armata (0 } 0,48% de celulas Caco-2; 1,44 } 0,81% de celulas HepG-2), P. cartilagineum (4,95 } 1,19% de celulas Caco-2; 14,87 } 1,04% de celulas HepG-2) e S. coronopifolius (0,96 } 0,51 de celulas Caco-2; 0,39 } 0,27% de celulas HepG-2) exibiriam o maior efeito de inibicao na proliferacao celular das celulas Caco-2 e HepG-2. Todos os efeitos observados foram dependentes da concentracao. A fracao diclorometano da S. coronopifolius exibiu o efeito mais potente sobre a proliferacao das celulas Caco-2 e HepG-2, com um IC50 de 36,5 e 32,3 ƒÊg ml-1, respetivamente. Conclui-se que as algas Asparagopsis armata, Fucus spiralis, Plocamium cartilagineum e Sphaerococcus coronopifolius produzem moleculas bioativas com elevado potencial antitumoral contra as celulas Caco-2 e HepG-2, sendo portantouma fonte promissora de novos compostos com aplicacao terapeutica no cancro.
- Isolamento e caracterização de fosfatases do tipo 2C e proteínas PYR/PYL em Armeria welwitschiiPublication . Delgado, RodolfoO ácido abscisico (ABA) tem um papel fundamental na resposta a situações de stress, em particular stress hídrico e salino. Recentemente foi identificada em Arabidopsis thaliana uma família de recetores citoplasmáticos de ABA (proteínas PYR/PYL/RCAR) que, em presença de ABA, inibem a atividade das proteínas fosfatases do tipo 2C (PP2C) do grupo A que são reguladores negativos da resposta a ABA. O habitat natural de Armeria welwitschii é um habitat em que em que o stress hídrico e salino é elevado e em que, os mecanismos de resistência a esses tipos de stress assumem um papel particularmente importante na sobrevivência dos indivíduos. A existência de populações a diferentes distâncias do mar e, portanto, sujeitas provavelmente a níveis bastante diferentes de stress constitui uma oportunidade para analisar a forma como os diferentes componentes da via de sinalização de ABA (e em particular as proteínas PYR/PYL/RCAR e as PP2Cs) são reguladas de forma a permitir a adaptação a essas condições. Neste trabalho, a identificação de genes que codificam proteínas PYR/PYL/RCAR e fosfatases do tipo 2C do grupo A em Armeria welwitschii, teve como base a análise de sequências dessas proteínas, e a correspondente sequência de nucleótidos, de espécies como Physcomitrella patens, Selaginella moellendorffii, Populus trichocarpa e Oryza sativa e Arabidopsis thaliana de forma a permitir o desenho de primers degenerados. As sequências foram alinhadas e as zonas conservadas foram consideradas para o desenho de primers degenerados. A amplificação foi efetuada utilizando cDNA obtido por transcrição reversa do RNA total extraído de Armeria welwitschii. Por reamplificação do produto obtido numa primeira reação e após clonagem dos produtos de amplificação verificou-se que se tinha isolado uma sequência de cDNA que apresentava uma elevada semelhança com PP2Cs de Arabidopsis thaliana.
- Biotechnological potential of impacted scenarios for the restoration of TBT contaminated environmentsPublication . Monteiro, HugoTributyltin (TBT) is an organotin compound commonly used as an antifouling agent in marine paint formulations. Due to its wide industrial application and its consequent discharge into the environment, TBT pollution is recognized as major environmental problem at a global scale, being recently considered to be the most toxic substance ever introduced into the marine environment. Microorganisms from historically contaminated sites are able to tolerate pollutants and even degrade them, which may be a key factor in the restoration of contaminated environments. Nevertheless, byproducts resulting from the degradation process might be more or less toxic than the parent compound to ecological relevant species. The determination of the substance presence by analytical chemistry, although essential, may not present ecological relevance, as it might not be related to its ecotoxicity. In this study, TBT-resistant bacteria collected from 7 Portuguese ports (Póvoa de Varzim, Leixões, Aveiro, Figueira da Foz, Peniche, Setúbal and Sines) were isolated in increasing concentrations of the toxicant (0.1, 1, and 3mM of TBT) and those growing at the highest concentration were characterized by genomic fingerprinting (REP-PCR) and tested as potential bioremediation tool in laboratory contaminated media. The percentage of TBT-resistant isolates varied between 0.08% (Setúbal harbor) and 7.67% (Peniche). REP-PCR analysis revealed a total 111 distinct genetic profiles, being Peniche the location with lower variability while Figueira da Foz had the highest variability. Selected isolates were used to bioremediate waters contaminated waters, and their potential as bioremediation tools was assessed through ecotoxicological testing with the gastropod Gibbula umbilicalis. Ecotoxicological testing suggested that some TBTresistant bacteria are able to reduce the toxicity of TBT contaminated waters. This study contributed to the understanding of TBT resistance, however more intensive and focused research in the area of TBT bioremediation mediated by marine bacteria is still needed, particularly on the mechanisms behind TBT resistance and on the identification of pathways and genes responsible for TBT degradation.
- Contributos para o desenvolvimento de um Biosensor no cultivo de microalgasPublication . Velez Silva, CátiaO cultivo de Isochrysis galbana e de Nannochloropsis gaditana foi efetuado em diferentes tipos de fotobioreactores (PBR). Para tal, foram definidas as curvas de crescimento para cada microalga e PBR, através da contagem direta das células por hematócitometro. De seguida estabeleceram-se as diferentes fases de crescimento para cada cultivo. Paralelamente à contagem direta das células foi efetuado por espectrofotómetria um varrimento dos 400nm aos 700nm, no qual se obtiveram os seguintes comprimentos de onda 422nm, 441nm, 540nm e 547nm. Os comprimentos de onda obtidos foram correlacionados com a densidade celular, permitindo através da análise estatística definir uma reta-padrão para cada tipo de reator e microalga. A reta-padrão da I. galbana foi definida a 441nm no balão volumétrico e no PBR airlift. Por outro lado a reta-padrão da N. gaditana foi definida a 540nm, nos mesmos PBR. O PBR coluna de bolhas não permitiu a definição de uma reta-padrão devido à reduzida fase exponencial presente em ambos os cultivos. Ao longo do tempo estimou-se a clorofila a, c e feofitina para a I. galbana. Clorofila a e feofitina, para a N. gaditana e verificou-se uma aumento ao longo do tempo, apresentando o PBR airlift uma maior concentração de clorofilas no dia 10 (68,4 mg L-1), no entanto o método de extração utilizado não foi eficiente. A I. galbana apresentou uma concentração máxima de clorofila a de 1177,74 mg L-1 no balão volumétrico, ficando por estimar a clorofila presente no PBR airlift. Nos cultivos de I. galbana e de N. gaditana verificou-se uma diminuição do peso seco (PS) e do peso seco livre de cinzas (PSLC) ao longo da fase de aceleração e exponencial devido à divisão celular. O cultivo de I. galbana no PBR airlift apresentou uma densidade celular máxima muito superior aos restantes PBR´s, este facto deve-se ao tipo de agitação deste PBR, à hidrodinâmica e à pouca sedimentação. Pelo contrário o PBR coluna de bolhas apresentou uma reduzida densidade celular, rendimento e taxa especifica de crescimento da cultura, este facto deve-se à má homogeneização presente neste PBR, fazendo com que as microalgas não se encontrem todas sujeitas às mesmas condições e ainda à sedimentação dessas mesmas microalgas em redor do difusor, o mesmo facto verificou-se para a N. gaditana. A N. gaditana atinge uma densidade celular mais elevada no balão volumétrico do que nos restantes PBR´s. Os dados obtidos no presente trabalho contribuirão para a definição de um algoritmo a ser utilizado na construção de um biosensor tendo por base a leitura da densidade ótica na região do visível através de análise espectrofotometrica, para assim proceder à monitorização das culturas em tempo real e por métodos não intrusivos.
- Produção e caracterização da capacidade antioxidante de gelo suplementado com extrato de Fucus spiralisPublication . Rodrigues, AnaO peixe fresco é suscetível à deterioração causada por reações microbiológicas e químicas. A deterioração lipídica ocorre facilmente e limita a vida de prateleira de peixes gordos durante o armazenamento. Compostos bioativos, como compostos fenólicos presentes em algas como a Fucus spiralis com elevada capacidade antioxidante podem ser utilizadas para retardar ou inibir os processos de oxidação lipídica no pescado fresco. No presente trabalho, avaliou-se a eficiência da utilização Algelo, gelo suplementado com extrato da alga Fucus spiralis, na estabilidade oxidativa da sardinha (Sardina pilchardus). Os compostos bioativos foram extraídos da alga Fucus spiralis com recurso a solventes polares, a água e o etanol com diferentes proporções. Foi avaliada a capacidade antioxidante das diferentes extrações e do Algelo através de dois métodos, a Quantificação Total de Polifenóis (QTP) e a capacidade de redução do radical 1, 1-Diphenyl2-picrylhydrazyl (DPPH). A estabilidade oxidativa da sardinha foi avaliada pela determinação do índice do ácido tiobarbitúrico (TBA) e pela determinação dos parâmetros de cor L* e a*. As extrações com etanol demonstraram elevada capacidade de captação de compostos fenólicos, sendo esta capacidade independente da % de etanol. As soluções resultantes da extração da alga Fucus spiralis demonstraram estabilidade antioxidante durante 60 dias. No entanto, o Algelo mostrou pouca capacidade para reter os compostos antioxidantes, sendo estes maioritariamente lixiviados na água de degelo. Foram feitas duas concentrações da solução utilizada para produção de Algelo, 100 / e 500 mg de eq. de ácido gálico /l, de modo a avaliar o efeito deste na oxidação lipídica dos filetes de sardinha. Apenas a concentração de Algelo mais elevada mostrou reduzir a oxidação lipídica da sardinha às 48 horas. Os parâmetros de cor L* e a* da sardinha não foram alterados pela presença do Algelo. Como conclusão, podemos afirmar que a solução de gelo suplementado com extratos de Fucus spiralis tem elevada capacidade antioxidante, sendo estável ao longo do tempo. O Algelo não se mostrou muito eficaz na inibição da oxidação lipídica da sardinha, facto que poderá estar relacionado com a perda da capacidade antioxidante do Algelo à superfície, com perda das moléculas antioxidante na água de degelo.