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Isolamento e caracterização de fosfatases do tipo 2C e proteínas PYR/PYL em Armeria welwitschii
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Abstract(s)
O ácido abscisico (ABA) tem um papel fundamental na resposta a situações de stress, em particular stress hídrico e salino. Recentemente foi identificada em Arabidopsis thaliana uma família de recetores citoplasmáticos de ABA (proteínas PYR/PYL/RCAR) que, em presença de ABA, inibem a atividade das proteínas fosfatases do tipo 2C (PP2C) do grupo A que são reguladores negativos da resposta a ABA.
O habitat natural de Armeria welwitschii é um habitat em que em que o stress hídrico e salino é elevado e em que, os mecanismos de resistência a esses tipos de stress assumem um papel particularmente importante na sobrevivência dos indivíduos. A existência de populações a diferentes distâncias do mar e, portanto, sujeitas provavelmente a níveis bastante diferentes de stress constitui uma oportunidade para analisar a forma como os diferentes componentes da via de sinalização de ABA (e em particular as proteínas PYR/PYL/RCAR e as PP2Cs) são reguladas de forma a permitir a adaptação a essas condições.
Neste trabalho, a identificação de genes que codificam proteínas PYR/PYL/RCAR e fosfatases do tipo 2C do grupo A em Armeria welwitschii, teve como base a análise de sequências dessas proteínas, e a correspondente sequência de nucleótidos, de espécies como Physcomitrella patens, Selaginella moellendorffii, Populus trichocarpa e Oryza sativa e Arabidopsis thaliana de forma a permitir o desenho de primers degenerados.
As sequências foram alinhadas e as zonas conservadas foram consideradas para o desenho de primers degenerados. A amplificação foi efetuada utilizando cDNA obtido por transcrição reversa do RNA total extraído de Armeria welwitschii.
Por reamplificação do produto obtido numa primeira reação e após clonagem dos produtos de amplificação verificou-se que se tinha isolado uma sequência de cDNA que apresentava uma elevada semelhança com PP2Cs de Arabidopsis thaliana.
Description
Dissertação de Mestrado em Biotecnologia dos Recursos Marinhos apresentada à ESTM - Escola Superior de Turismo e Tecnologia do Mar do Instituto Politécnico de Leiria
Keywords
Ácido Abscisico (ABA) Armeria welwitschii Recetores PYR/PYL/RCAR Fosfatases do tipo 2C (PP2C) Stress hídrico e salino Primers degenerados PCR Clonagem