Publication
Development of a new ultra-fast freezing procedure for zebrafish sperm cryopreservation
| datacite.subject.fos | Engenharia e Tecnologia | pt_PT |
| dc.contributor.advisor | Afonso, Ana Catarina Caetano Certal | |
| dc.contributor.advisor | Afonso, Clélia Paulete Correia Neves | |
| dc.contributor.author | Rebocho, Sandra Raquel de Melo Vieira Martins | |
| dc.date.accessioned | 2018-05-29T15:03:24Z | |
| dc.date.available | 2018-05-29T15:03:24Z | |
| dc.date.issued | 2018-05-28 | |
| dc.description.abstract | À medida que novas linhas novas geneticamente modificadas vão sendo geradas, aumenta o desafio de manter este vasto número de peixes-zebra. Desta forma, a criopreservação de esperma tem sido considerada uma ótima opção para o armazenamento a longo prazo de material genético reduzindo assim custos inerentes à sua manutenção. Os métodos tradicionais de criopreservação e vitrificação são os mais utilizados para criopreservar células. A vitrificação apresenta inúmeras vantagens sobre o método tradicional, entre as quais a não formação de cristais de gelo através de elevadas taxas de arrefecimento. Desta forma, a concentração de agentes crioprotetores utilizados pode ser menor, diminuindo o seu efeito tóxico nas células. A falta de padronização e resultados coesos em estudos anteriores foram as principais razões para o desenvolvimento de um método simples e consistente na Plataforma de Peixes da Fundação Champalimaud. Desta forma, o objetivo principal desta tese foi o desenvolvimento de um protocolo fácil, económico e coerente, designado por congelamento ultra-rápido. Este método otimizado para a criopreservação de esperma de peixe-zebra terá um impacto muito importante na comunidade científica. De 23 protocolos testados (n = 201), foram escolhidos para criopreservação de esperma de peixe-zebra os que apresentaram melhores resultados tendo em conta a percentagem de recuperação de linhas, a taxa média de fertilização, a taxa média de sobrevivência das larvas e a taxa média de malformações. Desta forma, foram selecionados dois protocolos com combinações de extender e crioprotector distintas. Em relação aos métodos complementares utilizados na otimização do protocolo de criopreservação, a estimulação hormonal das fêmeas com 17α,20β-DHP traduziu-se claramente numa melhoria na qualidade e quantidade dos oócitos, sendo um passo muito importante na otimização deste protocolo; a quantificação da concentração de esperma é útil apenas com amostras translúcidas, no entanto indicou que a concentração de esperma não pode ser correlacionada com a taxa de fertilização; o protocolo otimizado de FIV (fertilização in vitro) é, no momento, um serviço prestado pela Plataforma de Peixes da Fundação Champalimaud. Paralelamente à otimização da criopreservação de esperma, foi otimizado um protocolo de transgénese usando o sistema de transposão Tol2 com microinjeção in vitro de oócitos seguido pela técnica de FIV otimizada anteriormente. Com este método, a percentagem de fundadores transgénicos de uma linha transgénica estável foi de 66.67%, muito superior à observada em microinjeção no estádio de zigoto. Foi ainda realizada uma análise da viabilidade do esperma em peixes alimentados com duas dietas comerciais (Skretting Gemma® e SparosZebrafeed®) tendo como conclusão que ambas as dietas são semelhantes. | pt_PT |
| dc.identifier.tid | 201923874 | pt_PT |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.8/3260 | |
| dc.language.iso | eng | pt_PT |
| dc.subject | criopreservação | pt_PT |
| dc.subject | fertilização in vitro | pt_PT |
| dc.subject | esperma | pt_PT |
| dc.subject | peixe-zebra | pt_PT |
| dc.title | Development of a new ultra-fast freezing procedure for zebrafish sperm cryopreservation | pt_PT |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| rcaap.rights | openAccess | pt_PT |
| rcaap.type | masterThesis | pt_PT |
| thesis.degree.name | Mestrado em Biotecnologia dos Recursos Marinhos | pt_PT |
Files
Original bundle
1 - 1 of 1
Loading...
- Name:
- Dissertação Mestrado BRM-Sandra Rebocho.pdf
- Size:
- 3.91 MB
- Format:
- Adobe Portable Document Format
- Description:
License bundle
1 - 1 of 1
No Thumbnail Available
- Name:
- license.txt
- Size:
- 1.32 KB
- Format:
- Item-specific license agreed upon to submission
- Description: