Desenvolvimento de vacinas recombinantes contra Vibrio spp. usando um canal da membrana externa como alvo

Seabra, Rafaela Videira

http://hdl.handle.net/10400.8/6527

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Authors

Seabra, Rafaela Videira

Advisor(s)

Vieira-Pires, Ricardo Simão

Afonso, Clélia Paulete Correia Neves

Abstract(s)

Vibrio é um género de bactérias Gram-negativas ubíquas nos ecossistemas aquáticos. A Vibriose é uma doença hemorrágica septicémica mortal e está entre as doenças mais comuns que levam à mortalidade em massa de organismos marinhos de cultivo, sendo uma causa bem conhecida de graves perdas económicas na indústria de aquacultura. O uso de antibióticos tem sido uma prática comum também nesta indústria da aquacultura, mas a demanda global pela redução do seu uso devido ao fenómeno da resistência aos antimicrobianos tem promovido o desenvolvimento de medidas alternativas de control. A vacinação está entre essas estratégias de control da Vibriose. Os sistemas de secreção bacteriana são responsáveis em particular pela expulsão de componentes citotóxicos, nomeadamente antibióticos, e desempenham um papel crítico nos fenómenos de resistência aos antimicrobianos. No presente trabalho, utilizámos a proteína canal-túnel TolC da membrana externa, um componente dos sistemas de secreção do tipo I, como proteína alvo para o desenho de vacinas recombinantes. As proteínas TolCs de diferentes patógenos Vibrio de peixes foram identificadas e suas regiões extracelulares foram desenhadas expressas e purificadas como epítopos recombinantes e posteriormente caracterizadas em termos de estabilidade e rendimento de produção. Foram desenhados, clonamos e purificamos com sucesso 8 epítopos recombinantes correspondentes aos Loop-1 (L1) e Loop-2 (L2) extracelular dos seguintes patógenos Vibrio de peixes: V.anguillarum (VAU), V.parahaemolyticus (VPK), V. vulnificus (VVL) e V.harveyi (VHR). Todos eles apresentavam diferentes composições de aminoácidos, acabando por funcionar como assinaturas únicas para cada organismo. Esses novos produtos recombinantes serão a base para a formulação de vacinas para imunização ativa de peixes hospedeiros, ou mesmo para produção de anticorpos para procedimentos de imunização passiva. Além disso, os anticorpos derivados dessas vacinas podem ser usados para monitorização e diagnóstico patógenos Vibrio de peixes.

Description

This work was co-funded by Portuguese national funds via the Foundation for Science and Technology (FCT) and by the European Social Fund (ESF) through Human Potential Operational Programme (POPH) under grant IF/00123/2013 and the European Regional Development Fund (ERDF) through Operational Programme for Competitiveness and Internationalisation (COMPETE 2020) under the projects POCI01-0145-FEDER030550 (PTDC/BTM-SAL/30550/2017; BYDRUG), UIDB/04539/2020 and UIDP/04539/2020 (CIBB). Private funds from the company HBT - Saúde e Biotecnologia Lda (Portugal) also supported the work.