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Melhoramento genético de estirpes Saccharomyces cerevisiae YAP1-GFP e MSN2-GFP para a determinação de sensibilidade a drogas
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| 2.88 MB | Adobe PDF |
Authors
Abstract(s)
No âmbito da saúde e farmacologia a procura de compostos para a prevenção e tratamento
de doenças é constante, tendo sido valorizada atualmente a medicina tradicional aliada à
existência de diversos compostos naturais provenientes de plantas, fungos e bactérias com
ação anti-inflamatória e antimicrobiana. Logo é valorizada a investigação e estudos
específicos das propriedades terapêuticas de compostos, dos mecanismos de ação e
compreensão dos seus efeitos, úteis ao avanço da medicina. Posto isto, aliada à relevância
do stresse oxidativo, associado a danos oxidativos e envolvimento em várias doenças
humanas e no processo de envelhecimento, surge a necessidade de construção de uma
ferramenta que permita estudar o efeito de drogas ao nível do stresse oxidativo, de modo a
avaliar o potencial terapêutico, clarificar a respetiva função e abranger a aplicação de
compostos que têm sido cada vez mais valorizados. Assim, foi delineado como objetivo o
melhoramento genético de estripes Saccharomyces cerevisiae, de modo a promover a
acumulação de drogas e, consequentemente promover as condições que despoletam a ação
dos ativadores Yap1 e Msn2 ao nível do stresse oxidativo.
Neste contexto, foi otimizada uma metodologia para a construção de novas estirpes
haploides de S. cerevisiae com seis cruzamentos distintos que combinam a deleção
independente de três transportadores diferentes (TxΔ, TyΔ e TzΔ) e, em simultâneo, cada
um dos ativadores Yap1 e Msn2 em fusão com a Gfp (A-GFP). Estas estirpes haploides
foram selecionadas por análises fenotípicas, confirmadas ao nível do genótipo pretendido
por PCR e ensaios de microscopia de fluorescência quando sujeitas previamente ao
tratamento com H2O2, que não só confirmou o genótipo A-GFP, como também permitiu
avaliar qualitativamente a sensibilidade das estirpes ao H2O2 pela observação da
localização nuclear da Gfp. No sentido de obter uma ferramenta simples de fácil
manipulação e baixo custo que facilite a exposição de compostos e permanência no interior
das células, de modo a potenciar o seu efeito a baixas concentrações e permitir uma análise
mais assertiva, criou-se uma ferramenta que permitirá a caracterização de propriedades e
efeitos pró-oxidantes e/ou antioxidantes de drogas ao nível do stresse oxidativo em
levedura
Description
Keywords
Screening de drogas stresse oxidativo, Yap1 Msn2.