Pesquisa de fatores de patogenicidade e de resistência antimicrobiana em bactérias ictiopatogénicas

Dias, Lourenço Miguel Pinto Pereira

http://hdl.handle.net/10400.8/5771

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Tese Mestrado Lourenço Dias.4180250.pdf		996.63 KB	Adobe PDF	Download

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Authors

Dias, Lourenço Miguel Pinto Pereira

Advisor(s)

Campos, Maria Jorge Geraldes

Baptista, Teresa Maria Coelho

Abstract(s)

Uma das principais ameaças na área da aquacultura são as perdas económicas originadas por surtos de doenças infeciosas resultando na alta mortalidade dos cultivos. Atualmente, a patogenicidade e a resistência a antibióticos, de bactérias ictiopatogénicas é um problema sério que se agrava a cada dia, tornando-se num tópico de grande importância. O objetivo deste trabalho é estudar características fenotípicas e genes de virulência assim como genes de resistência a antimicrobianos de diferentes estirpes de bactérias ictiopatogénicas. Para tal, foram realizados testes fenotípicos de virulência e avaliada a presença de genes de virulência e de resistência a antimicrobianos, em diferentes estirpes de: Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Vibrio harveyi e Yersinia ruckeri. Foram estudadas seis estirpes ictiopatogénicas: Vibrio alginolyticus 12M CECTS21, Vibrio anguillarum 10J AQV 55, Vibrio harveyi Vh-017/18, Vibrio harveyi DSM 19623, Yersinia ruckeri QSP 57.1 e Yersinia ruckeri DSM 18506. Foram realizados cinco testes fenotípicos de virulência: proteolítico, lipolítico, formação de biofilmes, gelatinase e hemolítico. Para o proteolítico apresentaram resultados positivos as estirpes Vibrio harveyi Vh 017/16, Yersinia ruckeri DSM 18506, Yersinia ruckeri QSP 57.1, e para Vibrio anguillarum V10JAQV 55. No teste lipolítico apresentaram resultados positivos, Vibrio harveyi Vh 017/16 Yersinia ruckeri QSP 57.1, Vibrio anguillarum V10J AQV55 e Vibrio alginolyticus V12M CECT S21. Para a formação de biofilmes as estirpes Vibrio harveyi Vh 017/16, Vibrio alginolyticus V12M CECT S21 e Vibrio anguillarum V10J AQV55 apresentaram resultados positivos. No teste da gelatinase foram verificados resultados positivos nas estirpes Vibrio harveyi Vh 017/16, Vibrio alginolyticus V12M CECT S21 e Vibrio harveyi DSM 19623. Por fim para o teste da hemolisina apresentaram resultados positivos, Yersinia ruckeri QSP 57.1 e Vibrio anguillarum V10J AQV55. A presença de genes de virulência, determinada por PCR, foi realizada para um total de 17 genes de virulência específicos de ictiobactérias (ctxA, ompU, zot, tcpA(ToxR), tcpA (El Tor), tcpl, hlyA, hlyA (El Tor), stn/sto, luxR, vhh,vvh, yrp1, ompK, tlh, VPI, toxR) e para 23 genes de resistência (qnrS, qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qepA, blaIMP, blaVIM, blaKPC, blaNDM, blaOXA, blaCTX-M, blaSHV , blaTEM, mcr-1, mcr-2, mcr-3, mcr-4, mcr-5, mcr-6, mcr-7, mcr-8, mcr-9). Foi possível detetar o gene de virulência luxR para a estirpe Vibrio harveyi Vh-017/18 e os genes de virulência luxR e toxR para a estirpe Vibrio alginolyticus 12M CECTS21. A pesquisa de genes de resistência a antimicrobianos mostrou que nenhuma das estirpes possui genes que confiram resistência às quinolonas, colistina nem a β-lactamases de largo espectro.