Development of a multiplex PCR tool for screening of pathogens in teleost farmed fish

Abstract

A aquacultura desempenha um papel cada vez mais importante na produção de alimentos em todo o mundo (Martins et al., 2015). Espécies dos géneros Aeromonas, Vibrio, Edwardsiella e Streptococcus são patógenos que infetam peixes (Zhang et al., 2014), causando elevadas perdas económicas em aquacultura. A corvina (Argyrosomus regius, Asso, 1801) é um dos maiores peixes da família Sciaenidae a nível mundial, e uma espécie de elevado valor comercial no Sudoeste da Europa, sendo neste momento objeto de grande interesse em todo o Mediterrâneo visando a sua produção comercial (Amoedo, 2011). Devido à sua elevada fertilidade, ampla distribuição e boa aceitação por parte dos consumidores torna-se um bom candidato à produção em aquacultura podendo atingir preços de mercado médio-altos (6 euros/kg, INE 2010). Como ainda não foram reportadas manifestações patológicas relevantes nesta espécie, o principal método de prevenção é o controlo da densidade nos tanques, sendo necessário pesquisar eventuais patógenos que afetem a corvina em diferentes estádios do seu ciclo e mesmo em condições de stress. O objetivo deste estudo foi o desenvolvimento de uma ferramenta de multiplex- PCR para a deteção precoce de Edwardsiella tarda, Photobacterium damselae subsp. piscicida, Vibrio alginolyticus, Vibrio anguillarum e Vibrio harveyi em peixes de aquacultura, incluindo a corvina, que permita de forma prática e eficiente a deteção destes patógenos. Concluiu-se que é possível através de ferramentas de multiplex-PCR, a deteção dos patogénicos Edwardsiella tarda, Vibrio alginolyticus, Vibrio anguillarum e Vibrio harveyi até um limite mínimo de 0,4 ng de DNA/μl para V. anguillarum; 0.5 ng/μl para E. tarda; 1.5 ng/μl para V. harveyi e 5.6 ng/μl para V. alginolyticus, podendo, no futuro, estas técnicas ter aplicação prática cada vez mais extensa.